时隔3年后，韩时雨发布最新科研成果论文

继3年，曾处于舆论旋涡的韩风雪未公开了一项最近研究者成果。已对，韩风雪在亦同珍本网页BioRxiv上登载了一篇关于基因编辑的新撰文：Background free tracking of single RNA in living cells using catalytically inactive CasE。撰文计有5名所作，左至右为Feng Gao， Yue Sun， Feng Jiang， Xiaoyue Bai， Chunyu Han，实习单位皆为河北科技私立大学基因编辑研究者当中心。其当中，韩风雪为通讯所作。据了解，研究者当中所述的CasE是Ⅰ-E型 CRISPR复合物的核能心组分，它通过转化特定的花茎环状第一周围单独处理pre-crRNA，引述之为 CasE Binding S，简引述为CBS。CasE保守His20加入选择性，ΔHis26-TtCse3突变的CasE（dCasE）则失去了选择性，但仍然与其靶标紧密转化。在该研究者当中，通过将 split 配光与dCasE的N端和C-末端（ΔHis20）融合，相转化了来时体RNA工具VN-dCasE-VC。该系统对仅在存有靶RNA亦同配出配光，从而增强信噪比。在来时巨噬细胞当中进行可视化的RNA，不需要特定的亚巨噬细胞分布。CasE-GFP和dCasE-GFP在HEK293T巨噬细胞当中的高总体表达和皆匀分布声引述CasE和dCasE适合于于来时巨噬细胞当中的RNA操纵。为了测试CasE在类动物巨噬细胞当中表达时是否具有强来时性，所作相转化了“关闭”报告基因线粒体CBS-GFP-N1。它由5′-UTR当中的GFP mRNA和CasE转化位点（CBS）组成。当CasE被引入系统对时，GFP表达总体急剧下降。同时，为了进一步测试CasE来时性，所作还相转化了“开启”报告基因线粒体RED-16×CBS-Lin28-C1，其当中CBS插入RED多肽基因的3′-UTR第一区和Lin28的沿河。Lin28是RNA核能保留接收机，在其3′-UTR当中具有lin28接收机的RED多肽mRNA几乎不能转译成蛋白质。CBS-CasE依赖限制性切断lin28接收机并从核能释放靶mRNA用于转译（左图1E和左图1F）。这些声引述CasE可以转化并切割类动物巨噬细胞当中的CBS。另外，为了将dCasE-CBS相互作用结构设计到RNA系统对当中，所作通过将split-FP5-7与dCasE蛋白转化。配现一个版本，即VN-dCasE-VC很难配出配光，这意味著是由于不正确的接合或不稳定的状态，但是当与靶RNA（CBS）转化时，可以在配光显微镜下清楚地猎取配光接收机，即使VN-dCasE-VC表达线粒体的转染剂量非常偏高。接下来，所作使用VN-dCasE-VC系统对类动物巨噬细胞当中过表达的β-肝细胞（β-Actin）的mRNA，VN-dCasE-VC系统对在巨噬细胞质当中标示出出强配光。此外还观察到，向靶mRNA添加更为多CBS可加强接收机，配光更为模糊不清，因此，可以通过增加CBS的需求量来检测偏高丰度的mRNA。总的来说，韩风雪实习团队配明了一种在此便RNA工具，将其命名为VN-dCasE-VC，该系统对必须来时巨噬细胞当中不能氛围的特定RNA，通过配光将其可视化。现有较早两种来时巨噬细胞RNA成像工具，一种是MS2，一种是Cas13a，韩风雪实习团队共同开配的dCasE系统对，成像效果由于MS2，而且，dCasE蛋白的小分子为22kDa，远小于Cas13a的130kDa，dCasE的小小分子更为容易配送给至巨噬细胞内，因此更为适合于用于来时巨噬细胞的RNA。一位接近韩风雪的专业人士透漏：“这篇撰文是此前韩风雪实习的延续下去，目的都是共同开配基因编辑工具。”不过，值得注意的是，该研究者现有登载于亦同珍本网页，尚未经过同行审查则会，异议，有科研专业人士声引述，第一场在未经同行审查则会的亦同珍本上，是为了赢取第一场权。“韩风雪下一步还则会投在此之前期刊的。”前述专业人士推测。不明白此次在此便研究者成果是否则会终于给韩风雪带来关注，2016年5月，《自然—脊椎动物关键技术》登载韩风雪实习团队在此便基因编辑关键技术NgAgo，被媒体以“甘坐冷板凳、十年憋大招”的爱情故事他设计抹黑而走红，此后半年，韩风雪个人及其所在私立大学陆续赢取各类名誉和大量经费拨款，但亦有国内多名基因编辑信息技术科学家转配配声引述测试结果难以重复，怀疑测试结果的真实性。2017年8月，《自然—脊椎动物关键技术》登载篇文章《是该数据讲出的时候了》社论，年初撤韩风雪实习团队于2016年5月2日登载在该期刊的研究者。2018年9月，河北科技私立大学配布公告，韩风雪实习团队不存有主观捏造。但依据有关规定，取消韩风雪所赢取的荣誉引述号，终止韩风雪实习团队承担的科研成果并归还给科研经费。韩风雪实习团队反驳引述，测试结构设计存有局限性、研究者流程存有着不严谨的疑问。有业界专业人士暗示：“这波便，NgAgo这个研究者方向在当中国做得很慢。韩风雪他们的实习积极开展起来也比较困难，连学生也不能新招。”