CRISPR-Cas9内皮细胞的遗传标定应用于自问世以来之前因其辽阔的应用于前途吸引了相当多追捧。然而，CRISPR-Cas9控制系统的标定稳定性问题不利于了其必要性的仅仅应用于。当Cas9在遗传组特为定位点诱发DNA双链断裂后，其复建模式的选择暂时了最终的标定中间体：只有成功透过同源拆分（HR）才可完成特为罗斯季亚涅齐遗传的标定，而引发非同源末端直达（NHEJ）则时会引发遗传敲除。因此，领域内认为：如果可以；也驱使Cas9研磨DNA后的双链断裂复建选择偏向，实际上就可以改变遗传抗病毒建构的稳定性。
eLife 杂志Skype发表了同济大学附属第一妇婴保健院、微生物学与应用于学院毛志勇与高绍荣教授课题组共同开发的题为A high-throughput small molecule screen identifies farrerol as a potentiator of CRISPR/Cas9-mediated genome editing 的文章。这项社时会活动之前，制作团队的组织在毛志勇课题组前期创设的橘色紫外光DNA双链断裂复建分析报告细胞株之前（Nucleic Acids Research， 2019）建构了可由多九龙城伦抑止内切酶I-SceI表达的载体。利用这一新型控制系统，可做到最简单快速地通过多九龙城伦抑止遗传组特为定位点引发双链断裂，并基于流式细胞应用于分析细胞紫外光，从而判断钙离子的DNA双链断裂复建情况。
研究成果制作团队利用该PCR审核平台，核对显露了组分衍生物——杜鹃花伦（farrerol）可显着推动HR复建，并对NHEJ复建稳定性无明显负面影响。基于此，研究成果制作团队暂时尝试利用杜鹃花伦增加CRISPR-Cas9内皮细胞的遗传抗病毒建构稳定性。实验最近：杜鹃花伦在人和肠道细胞之前的多个遗传组位点很难做到更有效精确地抗病毒建构。此外，杜鹃花伦在肠道卵子水平也很难有效推动抗病毒建构稳定性，随后得到的抗病毒建构肠道也合乎生殖系引导的潜能。
该共同开发研究成果制作团队创设的新型PCR审核控制系统不具以下几项占有优势：（1）DNA双链断裂复建深受细胞周期负面影响相当程度，而转染本身时会对细胞周期所致一定负面影响。由于该控制系统即可加入多九龙城伦即可诱发双链断裂，而不需任何特为罗斯季亚涅齐遗传的转染，因此确实会了由转染对DNA复建所致的潜在妨碍；（2）本控制系统可配合流式细胞应用于或高表达方式审核控制系统透过高效客观的分析化学；（3）审核得到的负面影响DNA双链断裂复建的衍生物不仅可应用于于驱使Cas9标定稳定性，还不具其他多项潜在应用于实用性。如可利用选择性DNA复建的组分本品抗病毒癌症或与其他方法透过联合抗病毒治疗，以及利用推动DNA复建的组分本品改善遗传组稳定性以减缓再生的引发。
毛志勇与高绍荣教授课题组的该科学论文，将大大增加CRISPR-Cas9内皮细胞的遗传抗病毒建构稳定性。此外，该社时会活动见到杜鹃花伦通过推动拆分酶RAD51的快速招募，进而增加HR复建之前的非常精确的亚通路——遗传类比（gene conversion）或者交换（crossover）——的稳定性，而对确实所致重复序列拆分的螺旋形退火（single strand annealing）通路有显着糖皮质激素；该组分衍生物对各不相同细胞的遗传组稳定性、核型及卵子发育都没有显着的负面影响，而目前被广泛使用的推动CRISPR-Cas9内皮细胞的遗传抗病毒建构的组分SCR7及RS-1均表现显露了各不相同程度的遗传或发育毒性。该社时会活动的研究成果结果查看：杜鹃花伦既可以通过增加HR复建稳定性推动各不相同物种、各不相同位点的抗病毒建构稳定性，又合乎极低的细胞和卵子毒性，预示其不具重要的转化应用于潜能。
原始显露处：
Weina Zhang, Yu Chen, Jiaqing Yang, et al.A high-throughput small molecule screen identifies farrerol as a potentiator of CRISPR/Cas9-mediated genome editing.Elife. 2020 Jul 9;9:e56008. doi: 10.7554/eLife.56008.
相关新闻
相关问答
